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Anal. Chem. | 放射免疫斑点印迹法对复杂样品中的蛋白进行定量

2025-03-25 分类：学术论文阅读(71)

分享一篇发表在Analytical Chemistry上的文章，本文的通讯作者是来自芬兰Atalo大学的Markus B. Linder教授，他主要研究生物合成材料。在这篇文章中，作者开发了一种方法，使用链霉亲和素标签和氚标记的Strep-Tactin对复杂混合物样品进行放射免疫斑点印迹测定的特异性蛋白质定量。

在体内研究中，准确定量细胞裂解物等复杂混合物中的特定蛋白质是很困难的，尤其是对于易聚集的蛋白质。常见的特异性蛋白定量方法包括免疫印迹和放射性同位素印迹。相比于免疫印迹，斑点印迹方法更加简便，并有更好的重现性。此外，通过液体闪烁计数的方法进行测量可以避免荧光、放射性显影中信号饱和的问题，具有快速、线性范围宽的优势，并且其依赖放射性标签进行检测，可以不依赖抗体，适用性更广。在标记方面，亲和标签链霉亲和素可以用于重组系统的定量。该方法可以避免与抗体或其他天然标签的交叉反应，并且可以与放射性标记的液体闪烁计数方法兼容。

综合上述技术，作者提出了一种对特定蛋白，即蜘蛛重组丝蛋白进行定量的方法。在N端编码链霉素亲和标签和氚标记的Strep-Tactin，纤维素结合域作为另一个末端序列。首先，作者开发了放射免疫斑点印迹测试方法，通过液体闪烁计数检测氚活性，构建标准曲线。

定量精度为95%，对未知浓度的样品测试准确度为86%。检测限为19.3 ng（0.2 pmol），定量限为32.5 ng（0.4 pmol），其中19-400 ng为线性区域。

作者使用细菌裂解液样品测试了在复杂体系中对目标蛋白进行定量的能力。他们发现若样品质量较多，则对目标蛋白的检测会偏低；少量样品时复杂体系或纯蛋白样品的检测结果相当。作者猜想可能是细菌碎片影响了分析，为了提高定量准确度，他们去除了这些碎片，使复杂样品和纯蛋白有类似的准确度。

在本文中，作者开发了一种复杂混合物样品中对特定蛋白质定量的方法，该方法将斑点印迹方法与通过液体闪烁计数的放射性标记检测相结合，展现了优越的定量能力。

本文作者：WYJ

责任编辑：ZJ

原文链接：https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.analchem.4c03393

文章引用：https://doi.org/10.1021/acs.analchem.4c03393

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