引言
肝再生（Liver Regeneration, LR）能力的不足是导致肝切除术后肝衰竭及肝移植"小肝综合征"的核心临床难题，目前仍缺乏有效的治疗药物。绿原酸（Chlorogenic Acid, CGA）作为传统补肝中药杜仲的主要活性成分，其保肝功效早已被记载，但促进肝再生的直接靶点及深层机制此前尚不明确。
2026年3月，发表于Acta Pharmacologica Sinica的研究成果首次揭示了绿原酸通过直接靶向Keap1蛋白，激活Nrf2信号通路，从而加速肝细胞周期进程与能量代谢，显著促进肝再生的分子机制。在该研究中，纳孚生物提供的**生物素标记绿原酸探针（Biotin-CGA）**扮演了验证"直接相互作用"的关键角色。
研究挑战：从功能表型到直接靶点的确认
尽管前期研究已表明绿原酸对肝脏具有保护作用，但要证明其能直接与特定蛋白（Keap1）结合并发挥调控作用，面临着两大技术难点：
互作验证
传统方法难以确定绿原酸这种天然小分子与Keap1蛋白之间是否存在直接且特异性的物理结合。天然小分子与靶蛋白的结合往往是低亲和力的、瞬时的，常规的免疫共沉淀（Co-IP）方法难以有效捕获。
结合位点定位
需要精确识别绿原酸结合在Keap1蛋白的哪个关键氨基酸残基上，以解析其构效关系，为后续药物优化提供指导。
解决方案：纳孚生物高品质生物素标记探针
为解决上述难题，研究团队采用了纳孚生物定制的生物素标记绿原酸探针（Biotin-CGA）。该探针在保留绿原酸天然活性的基础上，引入了生物素标签，使其能够通过链霉亲和素系统进行高灵敏度的分子互作捕获。
Biotin-CGA的设计要点
活性保留：生物素标签的引入不影响绿原酸与靶蛋白的结合活性
Linker优化：采用适当的连接臂长度，避免空间位阻影响分子识别
高纯度制备：确保探针纯度≥95%，避免未标记绿原酸的竞争干扰
稳定性：在实验条件下保持化学稳定性和生物活性
关键实验结果
利用该生物素标记探针，研究团队通过微量热泳动（MST）和pull-down实验，获得了以下突破性发现：
验证直接结合
实验证实，绿原酸与Keap1蛋白的Kelch结构域存在直接的物理相互作用，解离常数（Kd）达到微摩尔级别，明确了Keap1是绿原酸发挥促肝再生作用的直接靶点。
定位关键残基
借助生物素标记探针的结合竞争实验，结合分子对接与点突变技术，研究人员精准鉴定出Keap1蛋白的Arg415残基是结合绿原酸的关键位点。
机制通路解析
绿原酸与Keap1结合后，释放被Keap1抑制的Nrf2转录因子，Nrf2入核激活下游抗氧化和细胞增殖相关基因的表达，从而促进肝细胞周期进程与能量代谢，加速肝再生。
生物素标记小分子探针的通用策略
这项研究也展示了生物素标记小分子探针在靶点验证中的通用策略，可推广至更多天然产物的靶点鉴定：
适用范围
天然活性成分靶点鉴定：中药活性成分、天然小分子的直接靶蛋白发现
药物-蛋白互作验证：确认候选药物与靶蛋白的直接结合关系
结合位点定位：结合点突变和分子对接技术，精确定位结合残基
竞争性结合实验：利用生物素标记探针与候选分子的竞争关系，评估结合亲和力
技术优势
凯康镁科技的生物素标记定制服务
纳孚生物在生物素标记小分子探针定制合成领域拥有丰富经验，可为您的靶点验证研究提供：
生物素标记天然产物：从绿原酸到各类中药活性成分，均可定制标记
生物素标记药物分子：候选药物分子的生物素化探针制备
多种Linker选择：PEG系列、烷基链等不同长度连接臂，优化标记效率
结构优化建议：根据分子特性推荐最佳标记位点与策略
参考文献
Chen, X., et al. (2026). Chlorogenic acid promotes liver regeneration after partial hepatectomy through activating Nrf2 via directly targeting Keap1. Acta Pharmacologica Sinica.
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