摘要
在快速液相制备色谱中,分离柱串联模式是一种常用的提高分离度的方法。在之前的应用文章《多根分离柱串联以提高分离度在化合物纯化方面的应用》一文中,我们已经从原理上详细阐述了分离柱串联是如何提高分离度的,并探讨了分离柱串联在实际样品的分离纯化中的应用。在本应用案例中,我们以某有机光电材料的分离纯化为例,再次论证分离柱串联对提高分离度的实用价值。
实验部分
本文中的样品为有机光电材料的合成粗品,由某OLED新材料研发公司提供。关于SepaBean™ Machine配合SepaFlash®系列分离柱在有机光电材料的快速纯化制备方面的应用,可参阅我们之前发表的另一篇应用案例《SepaBean™ machine快速制备色谱系统在有机光电材料领域的应用》。
首先通过薄层色谱法(TLC)对样品进行初步分析,将样品在TLC板上点样后置于展开缸中展开,展开剂为正己烷/乙酸乙酯。观察TLC展板情况可知(如图1所示),该样品纯度不高,可以看到明显的两个较浓的杂质点,且杂质点与目标化合物对应的点距离很近,分离度不高,后续分离纯化有一定的难度。
图1. TLC原理示意图(左边部分)及样品的TLC点板结果(右边部分)
三泰科技应用技术研究中心的研究人员利用SepaFlash®系列正相分离柱进行了样品的分离纯化实验。为提高对样品的分离度,研究人员采用了分离柱串联的模式,首先尝试了SepaFlash®标准型快速分离柱,将2根相同规格的分离柱串联后,再在分离柱上端连接一根固体上样柱。取100 mg样品溶于DCM中,并利用1 g硅胶进行拌样操作,然后旋干样品溶剂后将固体样品置于固体上样柱内。样品的Flash制备纯化实验条件参数如表1所示。
表1. 制备纯化实验参数设置
仪器 | SepaBean™ Machine 2 | |
色谱柱 | 12 g SepaFlash®标准型快速分离柱 (不定型硅胶, 40 - 63 μm, 60 Å, 订货号: S-8101-0012) 12 g SepaFlash®高效系列快速分离柱 (高载量球形硅胶, 25 μm, 50 Å, 订货号: SW-2102-012-SP(H)) | |
检测波长 | 220 nm; 254 nm | |
流动相 | 溶剂A: 正己烷; 溶剂B: 乙酸乙酯 | |
流速 | 15 mL/min | |
进样量 | 100 mg粗品 | |
洗脱梯度 | 时间 (min) | 溶剂B (%) |
0 | 0 | |
30 | 5 | |
43 | 5 | |
55 | 9 | |
56 | 100 | |
65 | 100 |
结果与讨论
样品在2根标准型快速分离柱串联使用条件下的分离图谱如图2所示。
图2. 样品在2根标准型快速分离柱串联使用(左边部分)条件下的制备分离图谱(右边部分)
分析图2可知,目标化合物与杂质未能达到基线分离,说明标准型快速分离柱串联使用未能获得足够的分离度。针对这一情况,研究人员接下来尝试了粒径更小的SepaFlash®高效系列快速分离柱。将两根相同规格的SepaFlash®高效系列快速分离柱串联,其他实验条件保持不变,在此条件下对样品进行了分离纯化,分离图谱如图3所示。
图3. 样品在2根高效型快速分离柱串联使用(左边部分)条件下的制备分离图谱(右边部分)
分析图3可知,目标化合物与杂质得到了基线分离,且分离度较高,说明更换高效系列快速分离柱后,柱串联模式获得了满足纯化需求的分离度。为进一步验证纯化结果,分别从目标化合物和杂质对应的收集组分中取样进行TLC点板检测,结果如图4所示。观察图4可知,目标化合物和杂质均获得了很好的分离纯化,可用于后续的进一步研究中。
图4. 原始样品及纯化后收集的各组分的TLC点板结果
关于SepaFlash®高效系列快速分离柱产品
三泰科技推出的SepaFlash® 高效系列快速分离柱产品具有多种规格(参见表2)。
表2. SepaFlash®高效系列快速分离柱参数
(填料:High-capacity spherical silica, 25 μm, 50 Å)
如需进一步了解SepaBean™ Machine的详细规格信息,或配套使用的Flash纯化柱订购信息,请访问CBG在线商店。