分享一篇发表在Anal. Chem.上的文章，题目为“Acrolein as an Alternative Broadly Reactive Activity-Based Probe for Activity-Based Protein Profiling of Cysteinome”，通讯作者是来自中国科学院大连化学物理研究所的秦洪强和叶明亮两位老师，他们团队的研究方向聚焦于蛋白质组学与翻译后修饰。这篇文章中，作者报道了丙烯醛作为基于活性的半胱氨酸组分析的广谱反应性探针。

基于活性的蛋白质组分析（ABPP）已经成为化学生物学中高通量功能分析的关键工具。然而广泛使用的基于碘乙酰胺（IAM）的半胱氨酸ABPP探针通常无法标记SN2反应性低的半胱氨酸，同时也面临探针尺寸过大或操作步骤繁琐等问题。因此作者希望设计具有不同反应机制的互补探针，并考虑最小化探针尺寸并简化工作流程。

于是作者首先考虑使用三种简单的α,β-不饱和羰基化合物——丙烯酸（AA）、丙烯酰胺（AM）和丙烯醛（ACR），通过基于凝胶的竞争性ABPP评估其硫醇反应性。Western Blot结果表明ACR显示出优于AA和AM的反应性。

随后作者使用ACR对细胞裂解液进行标记并直接进行蛋白质组学分析，结果显示ACR作为ABPP探针具有出色的质谱兼容性和广泛的蛋白质组反应性。

接着作者开发了基于ACR标记的化学蛋白质组学平台。在用胰蛋白酶消化ACR标记的蛋白质组后，使用固相酰肼微珠捕获标记肽段，去除非特异性肽段后使用甲氧胺释放捕获肽段。经过优化，这一策略可以在8807种蛋白质上鉴定到28282个半胱氨酸位点，其中包含很多与碘乙酰胺-炔基（IAA）和碘乙酰胺-脱硫生物素（DBIA）探针鉴定的半胱氨酸组不同的位点。

总的来说，本篇文章开发了一种丙烯醛的探针，用于基于活性的半胱氨酸组分析。

本文作者：LCX

责任编辑：LZ

DOI：10.1021/acs.analchem.5c00022

原文链接：https://doi.org/10.1021/acs.analchem.5c00022