分享一篇发表在Nature Cell Biology上的文章：Extracellular exosomal RNAs are glyco-modified，通讯作者是来自罗格斯大学的Megerditch Kiledjian教授和Sunny Sharma教授，前者课题组的研究方向是RNA的降解调控、RNA的糖基化和m6Am修饰等；后者的研究方向是RNA分子在编码蛋白质之外的分子机制。

外泌体是细胞分泌的纳米级脂质小泡，在细胞间通讯和生理病理过程中发挥重要作用。外泌体包含多种生物分子，其中 RNA在基因表达调控等方面具有关键功能。外泌体RNA在细胞间信息传递中具有潜在应用价值，如作为疾病诊断标志物和治疗工具等。糖基化是一种常见的蛋白质和脂质翻译后修饰，也存在于核酸等生物大分子上，但关于外泌体 RNA糖基化的系统研究尚属起步阶段。

为了确定是否能在内源性RNA上检测到糖修饰，作者采用了生物正交且细胞穿透性强的Ac4GlcNaz、Ac4GalNaz和Ac4ManNaz代谢标记的方法，对RNA进行标记，随后通过SPAAC点击化学对RNA进行可视化。有趣的是，在生物素标记的RNA种类中，明显观察到一种独特的、依赖于Ac4GalNAz的时空选择性模式。有趣的是，作者还发现糖基化RNA对序列特异性核酸酶RNase A不敏感，但对序列非特异性核酸酶RNase I敏感，且RNA降解现象明显。

为了揭示RNA糖基化修饰在细胞生理学中的作用，作者评估了其细胞内定位。作者采用了两种不同的生化方法来确定糖基化RNA在细胞器中的分布。第一种方法是将核与总细胞质分离，而第二种方法则进一步将细胞质分离为可溶性细胞质和膜性细胞器。结果表明，RNA信号几乎仅在细胞质中检测到，而在核中未检测到。此外，细胞质中的糖基化RNA主要在膜相关组分中检测到，而非可溶性部分。

为了直接确定glycoRNA是否定位于细胞外囊泡（EVs）中，作者从细胞系的培养上清液中提取外泌体，并从分离得到的外泌体中提取RNA。经过成像实验，作者发现Ac4GalNAz衍生的糖基化RNA几乎完全存在于外泌体中，而且将Ac4GalNAz标记的完整外泌体暴露于核酸酶后，标记的糖基化RNA含量未受影响，表明糖基化RNA被包裹在外泌体腔内，而非与表面结合。

总而言之，作者通过非天然糖代谢标记的方法，证明了外泌体囊泡的腔内存在glycoRNA。

本文作者：MB

责任编辑：LZ

DOI：10.1038/s41556-025-01682-1

原文链接：https://doi.org/10.1038/s41556-025-01682-1